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edman降解法

Edman降解(Edman degradation):

是测定蛋白质上等结构的方法,主要是从蛋白质或多肽氨基末端进行分析。由埃德曼(P.Edman)在上世纪50年代所创立。分为耦合、切割、萃取、转化、鉴定等几个步骤。

首先在pH 9.0的碱性环境下,将异硫氰酸苯酯(Ph-N=C=S,PITC)和蛋白质或多肽N端氨基酸耦合,形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物;然后以 TFA 处理耦合后产物,将多肽或蛋白的N一端**个肽键选择性的切断,释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物;随后萃取出释放的氨基酸衍生物并在强酸性条件下转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH-氨基酸);*后以色谱法鉴定出降解下来的PTH-氨基酸种类,从而得到蛋白质或多肽N端序列信息。Edman降解法的优点是异硫氰酸苯酯与所有氨基酸残基的反应产率和回收率都相当高,因此反应副产物少,用色谱可以准确鉴定。而且对大多数氨基酸残基而言,30 min的耦合反应时间、5 min的切割反应时间都已足够。

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